黑茶是我國(guó)特種茶之一,具有較長(zhǎng)時(shí)間渥堆發(fā)酵的加工工藝,在長(zhǎng)時(shí)間的渥堆過(guò)程中,微生物參與茶葉內(nèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化,產(chǎn)生特殊色香味品質(zhì),同時(shí),由于微生物的參與,黑茶產(chǎn)生了新的不同于普通茶葉的藥理功能及保健功能。與其他種類的茶葉相比,對(duì)黑茶的研究較少。雖然近年來(lái)對(duì)黑茶研究逐漸增多,但黑茶產(chǎn)生功效的作用機(jī)理大多仍不明確,這嚴(yán)重阻礙了黑茶進(jìn)一步發(fā)展及開(kāi)發(fā)。 因此,本研究以茯磚茶、花磚茶、青磚茶、黑磚茶、六堡茶、普洱茶為材料,以沱茶、米磚茶為對(duì)比材料,以高通量藥物篩選為手段對(duì)黑茶的抗代謝綜合癥、高膽固醇血癥、抗炎、抗消化道腫瘤活性進(jìn)行了系統(tǒng)的藥理功能分析及評(píng)價(jià);采用高速逆流色譜對(duì)黑茶的物質(zhì)成分進(jìn)行了分離研究以及采用高效薄層色譜對(duì)黑茶脂溶性色素以及茯磚茶金花脂溶性熒光物質(zhì)進(jìn)行了分析研究。

1.采用柱層析硅膠作為支持劑的部位分離法從茶葉的乙醇回流提取液中得到石油醚洗脫組分、氯仿洗脫組分、乙酸乙酯洗脫組分、乙醇洗脫組分;以熱水回流提取方式得到水提取成分。高效薄層檢測(cè)發(fā)現(xiàn)石油醚洗脫組分主要是類胡蘿卜素物質(zhì);氯仿洗脫組分主要是色素類物質(zhì)及茶堿;且黑茶的石油醚洗脫組分以及氯仿洗脫組分在366nm紫外光下有強(qiáng)熒光。高效液相色譜檢測(cè)分析后發(fā)現(xiàn)黑茶中沒(méi)食子酸的含量較高;在所有的黑茶中,普洱茶中沒(méi)食子酸的含量最高;而紅茶類的米磚茶中沒(méi)食子酸的含量也較高。同時(shí)發(fā)現(xiàn)黑茶中茶堿的含量較高,花磚茶中茶堿的含量則是其他黑茶的4～10倍。

2.選擇PPARd、PPARγ、FXR激活、FXR抑制、LXR共5種核受體模型評(píng)價(jià)黑茶組分的抗高脂血癥、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗肥胖等代謝綜合癥的生理活性,結(jié)果表明: (1)茯磚茶對(duì)PPARγ受體模型以及PPARδ核受體模型具有較好的激活作用,對(duì)LXR激活模型、FXR激活模型的激活作用都較強(qiáng),有望能夠從茯磚茶中發(fā)現(xiàn)抗脂減肥、治療動(dòng)脈粥樣硬化、以及治療糖尿病等抗代謝綜合癥的藥物;普洱茶對(duì)這幾種模型的作用結(jié)果顯示普洱茶可能具有良好的對(duì)糖及脂類代謝的雙向調(diào)節(jié)作用。 (2)六堡茶對(duì)FXR受體抑制模型表現(xiàn)出較好的活性;普洱茶中的中高極性對(duì)FXR受體抑制模型的活性也較好;而青磚茶中低極性成分對(duì)FXR受體抑制模型具較好的活性。因此,六堡茶、普洱茶及青磚茶具有較好的FXR抑制劑的篩選前景。同時(shí),黑茶的高極性物質(zhì)對(duì)FXR受體抑制模型也具較好的活性。 (3)沱茶乙酸乙酯洗脫組分具有增加FXR受體抑制敏感性的作用,這一作用可能是由兒茶素表現(xiàn)的。 (4)沱茶的水提取成分對(duì)兩種PPARs核受體模型幾乎沒(méi)有激活作用,而黑茶的水提取成分對(duì)于PPARs模型有較好的激活作用。這說(shuō)明黑茶經(jīng)過(guò)微生物發(fā),酵之后,能夠產(chǎn)生較多的易溶于水的抗脂減肥的生理活性成分。因此,直接飲用黑茶能夠降脂減肥、防止動(dòng)脈粥樣硬化。

3.選擇TNF、IL-1分泌細(xì)胞模型評(píng)價(jià)黑茶組分炕炎活性,黑茶組分對(duì)炎癥分泌因子模型沒(méi)有明顯的抑制活性。

4.選擇SGC-7901、HCT-8細(xì)胞株為模型評(píng)價(jià)黑茶組分對(duì)消化道腫瘤的抑制作用,結(jié)果顯示黑茶對(duì)消化道腫瘤生長(zhǎng)的抑制效果較好。黑茶的乙酸乙酯洗脫組分對(duì)消化道腫瘤的抑制作用較強(qiáng)。因此可使用乙酸乙酯洗脫的方式從黑茶中提取具有消化道腫瘤抑制作用的藥物前提物。黑茶中對(duì)對(duì)消化道腫瘤細(xì)胞HCT-8起抑制作用的物質(zhì)的極性要比對(duì)SGC-7901起抑制作用的物質(zhì)的極性高。

5.金花對(duì)所選擇的5種核受體模型都具有良好活性作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金花中對(duì)核受體有作用的活性成分的極性跨度較大。對(duì)消化道腫瘤的抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,金花同時(shí)具有很強(qiáng)的對(duì)消化道腫瘤的抑制作用。且低極性的金花氯仿洗脫組分的抑制活性要比中極性的金花乙酸乙酯洗脫組分的抑制活性更強(qiáng),與黑茶中的物質(zhì)相比,金花中起抑制作用的物質(zhì)更傾向于低極性。對(duì)金花中脂溶性熒光物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)也發(fā)現(xiàn)其中有多種生理活性物質(zhì)。對(duì)金花的生理功能評(píng)價(jià)的結(jié)果顯示,金花是很值得進(jìn)一步開(kāi)發(fā)的抗代謝綜合癥、抗高脂血癥、調(diào)節(jié)糖代謝的藥物前體物,同時(shí)也是抗消化道腫瘤藥物的前體物。

6.使用HSCCC分離黑茶中的物質(zhì)成分。利用乙酸乙酯-水為溶劑系統(tǒng),乙酸乙酯為流動(dòng)相,可以一次性的將黑茶中將的茶堿、咖啡堿、沒(méi)食子酸與兒茶素分離;茶堿、咖啡堿、沒(méi)食子酸的純度不低于99%。出峰順序依次是ECG、EGCG、EC和DL-C、沒(méi)食子酸、咖啡堿、茶堿。對(duì)黑茶水提取成分的分離中使用雙向洗脫法,可縮短HSCCC分離時(shí)間,并且使出峰峰型較為尖銳。

7.在可見(jiàn)光下,色素在硅膠薄層板經(jīng)石油醚:丙酮=7:3的展開(kāi)劑展開(kāi)后,清晰分離為9條色素帶,按R_f值從大到小依次是β-胡蘿卜素(β-Car,0.87,橙黃色)、未知色素(0.74,橙黃色)、脫鎂葉綠素酸脂a(Poa,0.65,灰綠色)、脫鎂葉綠素a(Pya,0.53,褐灰綠色)、脫鎂葉綠素酸脂b(Pob,0.49,綠黃色)、脫鎂葉綠素b及葉綠素酸脂a的混合色斑(Pyb/Cda,0.43,藍(lán)綠色或黃綠色)、葉綠素酸脂b(Cdb,0.37,褐黃色)、葉綠素b及葉黃素(Chlb/Xan,0.35,綠黃色或土黃色)、新黃質(zhì)(Neo,0.21,土黃色)。并且,在366 nm紫外光下,黑茶在R_f=0.70處有明顯的熒光斑。從黑茶中分離出的色素的光譜吸收特征與文獻(xiàn)上色素的光譜吸收特征差異較大:且不同黑茶中各色素的比例以及絕對(duì)含量上都有差異。

8.以脂溶性色素的含量為集群依據(jù),采用SPSS軟件對(duì)茶樣進(jìn)行聚類分析,集群分析樹(shù)形圖將兩種綠茶(沱茶、炒青綠茶)歸為一群,六堡茶單獨(dú)成群,黑茶及米磚茶歸為一類。其歸類結(jié)果反映了不同茶類本身的色澤特征及茶葉相互之間的相似程度。

9.以HPTLC分析金花中的脂溶性熒光物質(zhì)的光譜吸收特征,發(fā)現(xiàn)R_f=0.27處的條帶在241 nm、288 nm、366 nm處有較強(qiáng)的紫外吸收,它的最大吸收峰出現(xiàn)在366 nm處;而R_f=0.58處的條帶在241nm、290 nm處有較強(qiáng)的紫外吸收,它的最大吸收峰在290 nm處。同時(shí)以制備性薄層硅膠板對(duì)脂溶性熒光物質(zhì)進(jìn)行分離,以GS-MS聯(lián)用分析,從金花中檢測(cè)到下列物質(zhì):docosane、Hentriacontanc、Bis(2-ethylhexyl)phthalate、A-Neooleana-3(5),12-diene、Olean-12-ene、4,4,6a,6b,8a,11,11,14b-Octamethyl-1,4,4a,5,6,6a,6b,7,8,8a,9,10,11,12,12a,14,14a,14b-octadecahydro-2H-picen-3-one、a-Neooleana-3,12-diene、10,13-Dimethyl-17-(1,4,5-trimethyl-hex-2-enyl)-1,2,9,10,11,12,13,15,16,17-decahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one、Squalene、Friedelin。這些物質(zhì)都是首次從金花中發(fā)現(xiàn)。（宋魯彬）

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